作为北美、日本两地NDS首发的重磅大作，早在E3时就聚集万千目光于一身，代表着任天堂招牌的明星重拳出击，也果然没有让人失望。本作缘以当年N64上的百万大作超级马里奥64为蓝本制作，若仅单纯地将其看作为移植作品的话，那可就太小看山内了，此番的64DS借以原作的基本设定和3D概念，结合DS新主机的双屏、触摸等诸多新特机能，再辅以系统的强化和新要素的加入，呈现在玩家们面前的将是一款能带来完全不同感受的新游戏。
游戏模式
VS对战模式，可以支持最大四人单卡无线联机的模式，可以在此与朋友们共享对战冒险之乐。
Adventure冒险模式，游戏最主要的模式，以威力星来定义各关卡及任务，并以取得各关卡的威力星作为目标，在原N64版本的基础上增至150颗，全部15个场景世界的120颗基本关卡威力星和30颗隐藏关卡威力星，另游戏内容更加地丰富。
Rec Room迷你小游戏模式，通过在冒险模式游戏过程中各角色抓到兔子来相继开启的Mini游戏，初期设定为8款，全部共36款游戏，作为在NDS版中独增的模式，其耐玩度和游戏趣味不压于冒险模式的主游戏。
角色&操作介绍
Ⅰ 出场角色 
马里奥
力量 ★★☆
速度 ★★☆
跳跃 ★★☆
力量花 变大
作为系列的主角马里奥在一开始竟不能使用这到是出乎大家的意料，只有当耀西获得8颗威力星后到城堡二楼右边的管理迷你游戏的房间内，进入旁侧标有8的小屋，跳入壁画在关卡内打败老蘑菇得到马里奥的钥匙后方可使用。
在几位角色当中其能力是最为平均当然也是综合能力最强的，尽管速度显示的为二星，但实际操作起来却是最为灵便的，还有踢墙跳等独特的技巧，再加上攻击能力也不俗，故马里奥也是游戏中后期主要使用到的角色，依然突显其主角地位。
当其取得力量花或蘑菇后能变为气球漂浮状态或在一段时间内处于无敌状态的大马里奥，在获得羽毛或飞行帽的情况下也可在一定时间内成为飞行状态。
超级气球马里奥，能漂浮
个人技： 
马里奥踢墙跳，B+B 
